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大鼠骨髓來源內皮祖細胞分離培養試劑盒:含裂解液/清洗液/培養基的完整系統

更新時間:2025-08-22  |  點擊率:429

本試劑盒針對大鼠骨髓來源內皮祖細胞(Endothelial Progenitor Cells, EPCs)的分離與培養設計,提供從骨髓采集到原代細胞擴增的全流程解決方案。內皮祖細胞在血管新生、缺血組織修復及心血管疾病研究中具有重要價值,本產品通過優化試劑配方與操作流程,可高效獲取高活性、高純度的EPCs,適用于血管生物學、再生醫學及藥物篩選等領域。

產品組成

試劑盒包含以下核心組件,所有組件均標注規格(3Tests/10Tests)、儲存條件及有效期:

  • 大鼠骨髓來源內皮祖細胞專用清洗液
    規格:3Tests(250 mL);10Tests(500 mL×2)
    儲存條件:2-8℃
    有效期:12個月
    功能:含緩沖體系與抗生素,清除骨髓樣本中的血液成分及雜質,減少污染風險。

  • 大鼠骨髓來源內皮祖細胞專用裂解液
    規格:3Tests(15 mL);10Tests(50 mL)
    儲存條件:2-8℃
    有效期:12個月
    功能:特異性裂解紅細胞,保留白細胞及內皮祖細胞,提升目標細胞純度。

  • 大鼠骨髓來源內皮祖細胞基礎培養基
    規格:3Tests(100 mL);10Tests(300 mL)
    儲存條件:2-8℃
    有效期:12個月
    功能:含氨基酸、維生素及無血清成分,維持細胞基礎代謝需求。

  • 大鼠骨髓來源內皮祖細胞添加劑
    規格:3Tests(10 mL);10Tests(30 mL)
    儲存條件:-5~-20℃
    有效期:12個月
    功能:含重組人血管內皮生長因子(VEGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)及抗氧化劑,促進EPCs增殖與血管內皮表型維持。

  • 70 μm細胞濾網
    規格:3Tests(3個);10Tests(10個)
    儲存條件:常溫
    有效期:36個月
    功能:過濾骨髓碎片及未消化組織,獲得單細胞懸液。

實驗流程

實驗準備

自備器材

  • 手術器械(眼科剪×3、直鑷×3、彎鑷×3)、2 mL注射器、6 cm/10 cm培養皿、T25培養瓶、泡沫解剖板、注射器針頭(18G-22G)、15 mL/50 mL離心管。

預處理建議

  • 正式實驗前使用1-2只正常大鼠進行骨髓采集模擬訓練,優化沖洗與過濾操作速度。

操作步驟

  1. 骨髓采集與清洗 

    • 解剖取大鼠股骨與脛骨,用2 mL注射器吸取預冷清洗液,通過針頭反復沖洗骨髓腔至骨骼發白,收集骨髓懸液。

    • 4℃離心(300g,5min),棄上清,重復清洗1次以去除脂肪與血液成分。

  2. 紅細胞裂解 

    • 加入預溫至37℃的裂解液,輕柔吹打混勻后靜置5min,終止裂解反應。

    • 4℃離心(300g,5min),棄上清,用基礎培養基重懸細胞沉淀。

  3. 過濾與接種 

    • 細胞懸液經70μm濾網過濾,去除骨碎片與細胞團塊,收集濾液。

    • 計數后調整密度至1×10? cells/mL,接種至T25培養瓶,添加基礎培養基與添加劑(體積比100:1)。

  4. 培養與鑒定 

    • 置于37℃、5% CO?培養箱中培養,每2天換液。通過流式細胞術檢測CD34?/VEGFR2?細胞比例(>85%為合格)。

注意事項

  1. 骨髓沖洗技巧 

    • 使用18G針頭可提高沖洗效率,避免過度用力導致骨髓稀釋。

  2. 裂解時間控制 

    • 過度裂解會損傷EPCs,建議通過顯微鏡觀察懸液顏色(由紅色變為淡粉色時終止)。

  3. 添加劑使用 

    • 基礎培養基與添加劑需現用現混,避免光照降解生長因子。

常見問題解答

Q1:培養后細胞貼壁率低如何處理?
A:檢查培養基是否漏加添加劑,或嘗試在接種時添加纖連蛋白(5μg/cm2)促進貼壁。

Q2:如何區分內皮祖細胞與成熟內皮細胞?
A:內皮祖細胞呈圓形或簇狀生長,可檢測其攝取乙酰化低密度脂蛋白(DiL-Ac-LDL)的能力及管腔形成潛能。

儲存與運輸

  • 低溫組件(裂解液、添加劑):冰袋運輸,收到后立即存于-20℃。

  • 常溫組件(濾網):干燥避光保存。

  • 開封后建議:清洗液與基礎培養基4℃保存并于2周內用完;裂解液與添加劑分裝后-20℃保存,避免反復凍融。

產品優勢
? 專用配方:針對EPCs生物學特性設計,兼顧細胞活性與純度
? 操作簡化:預分裝試劑減少配制步驟,2小時內完成從取材到接種
? 性能驗證:經流式細胞術與功能實驗(管腔形成)雙重質控,確保細胞質量


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