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細胞學堂 | 超詳細的凋亡檢測試劑盒選擇指南!

更新時間:2024-06-28  |  點擊率:2496


細胞凋亡(Apoptosis),作為一種深入研究的程序性細胞死亡形式,近年來已成為生物學領域的熱門課題。如果你的研究涉及癌癥機制與療法、藥物篩選與藥理作用、生物發育、免疫學或神經科學等領域,細胞凋亡檢測無疑是你實驗設計中重要的一環。




在本期的細胞學堂中,我們將深入介紹不同類型凋亡檢測試劑盒的相關知識,并分享一些關于如何選擇凋亡檢測試劑盒的經驗,旨在幫助您輕松理解并為您的樣本選擇合適的凋亡檢測試劑盒。





常用凋亡檢測試劑盒的檢測原理

凋亡細胞在細胞形態和生理上與壞死細胞和正常細胞存在顯著不同,其細胞膜、細胞質、細胞核、核酸以及凋亡相關蛋白都發生明顯變化,具有鮮明特征。這些差異為我們提供了檢測細胞凋亡的多種方法。常用的細胞凋亡檢測方法包括形態學觀察、細胞膜磷脂外翻檢測、凋亡相關蛋白檢測、DNA斷裂檢測、細胞周期分析等。這些方法各有特點,可以根據實驗需求和條件選擇合適的檢測方法。

根據細胞凋亡的機制和特點,普諾賽®自主研發了Annexin V凋亡檢測試劑盒TUNEL凋亡檢測試劑盒Caspase活性檢測試劑盒線粒體膜電位(JC-1)檢測試劑盒

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Annexin V凋亡檢測試劑盒

檢測原理:Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨酸(PS)有高度親和力。在正常細胞中,PS通常位于細胞膜內側。然而,當細胞發生凋亡時,細胞膜的通透性會發生變化,細胞膜內側的PS部分外翻,暴露到細胞膜外側。Annexin V可通過與凋亡早期細胞胞外翻的PS結合,從而識別凋亡細胞。為了更便于檢測,將Annexin V標記上熒光染料,可通過流式細胞儀或熒光顯微鏡等設備檢測到帶有熒光的凋亡細胞。細胞核染料(PI、DAPI、7-AAD)可與雙鏈DNA特異性結合,并產生強烈的熒光。正常情況下大分子的核染料是無法透過細胞膜,由于凋亡晚期或壞死細胞膜喪失完整性,細胞核染料可進入細胞內對DNA進行染色,與Annexin V搭配使用,可區分處于不同凋亡時期的細胞。

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TUNEL凋亡檢測試劑盒

檢測原理:在細胞凋亡的晚期,染色體DNA雙鏈斷裂產生大量的粘性3'-OH末端。在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的作用下,脫氧核糖核苷酸與熒光素等標記物形成的衍生物可以被標記到斷裂DNA的3'-末端,從而進行凋亡細胞的檢測。

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Caspase活性檢測試劑盒

檢測原理:Caspase是一個蛋白酶家族,通常以無活性的酶原形式存在于細胞質中。活化的Caspase會破壞一些重要的胞內蛋白,從而引發凋亡的發生。將Caspase序列特異性的多肽酶偶聯至黃色基團pNA作為底物,當Caspase被活化后,它能夠剪切這個底物,釋放出游離的黃色基團。通過酶標儀或分光光度計測定這些黃色基團的吸光值,就可以定量評估Caspase的活性,從而間接地監測細胞凋亡的情況。

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線粒體膜電位(JC-1)檢測試劑盒

檢測原理:在正常細胞中,線粒體膜電位通常較高,JC-1主要在線粒體基質中聚集,以聚合體的形式存在,可產生紅色熒光。然而,在細胞凋亡的早期階段,線粒體膜電位會顯著降低,導致JC-1無法在線粒體基質中積累,主要以單體形式存在,可產生綠色熒光。通過JC-1從紅色熒光到綠色熒光的轉變可檢測到細胞膜電位的下降,可將JC-1熒光顏色的轉變作為細胞凋亡早期的檢測指標。





如何選擇凋亡檢測試劑盒

目前市售的凋亡檢測試劑盒種類眾多,如何選擇一款匹配自己檢測樣本和實驗條件的試劑盒至關重要。以下是兩點可供參考的建議:

01

基于樣本類型選擇

根據具體實驗設計和樣本類型,選擇合適的凋亡檢測試劑盒。推薦您參考下方表格所示的內容,以便為您的樣本類型選擇適當的凋亡檢測試劑盒。例如懸浮細胞或經消化下來的貼壁細胞,四種凋亡試劑盒都可考慮使用,這些試劑盒通常能夠適用于不同類型的細胞樣本。然而,對于組織樣本,需要注意不同的試劑盒樣本制備方法可能不同。使用TUNEL凋亡檢測試劑盒時,需制備石蠟或冷凍切片,而使用Caspase活性檢測試劑盒時,則需對組織進行機械剪碎、勻漿和裂解

02

基于實驗儀器和配置選擇

不同凋亡檢測試劑盒的使用需要配備對應的儀器。推薦您參考下方表格,根據實驗室現有的實驗儀器,選擇合適的凋亡檢測試劑盒。需要提醒的是,除了確認儀器是否可用,還需要了解實驗儀器的具體配置,例如流式細胞儀的熒光檢測通道和熒光顯微鏡的濾光片組等。

市售的Annexin V凋亡檢測試劑盒和TUNEL凋亡檢測試劑盒,有多種熒光染料組合可供選擇。在選擇熒光染料時,需根據儀器配置選擇能夠檢測的熒光染料。除此之外,如果您的細胞自帶熒光(如轉染了熒光蛋白的細胞或使用了帶熒光的藥物處理細胞),在儀器配置允許的前提下,優先選擇與細胞自發熒光不同檢測通道的熒光染料。如果受限于儀器配置條件,無法避免熒光染料光譜重疊,要注意合理設置單染管用于調節補償,以確保檢測結果的準確性。






普諾賽®凋亡檢測試劑盒相關信息

試劑盒種類

檢測樣本

檢測儀器

Annexin V凋亡檢測試劑盒

懸浮/貼壁細胞

流式細胞儀、熒光顯微鏡

TUNEL凋亡將測試劑盒

懸浮/貼壁細胞

流式細胞儀

細胞爬片/涂片、石蠟切片、冷凍切片

熒光顯微鏡

Caspase活性檢測試劑盒

細胞、組織

分光光度計、酶標儀

線粒體膜電位(JC-1)檢測試劑盒

懸浮/貼壁細胞

熒光顯微鏡、流式細胞儀



以上是關于凋亡檢測試劑盒的知識科普及選擇指南,更多細胞培養和檢測相關干貨,請持續關注細胞學堂專欄~



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